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  上海鼎桑生物科技有限公司一家專注于生命科學(xué)的科技企業(yè)，由在國內(nèi)科研試劑領(lǐng)域有著豐富從業(yè)經(jīng)驗(yàn)的技術(shù)團(tuán)隊(duì)和管理團(tuán)隊(duì)組建而成，專營進(jìn)口生物試劑，科學(xué)儀器，實(shí)驗(yàn)消耗品等。
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23966上海鼎桑代理

美國POLYSCIENCES公司成立于1961年，主要生產(chǎn)和經(jīng)營LIFE SCIENCES生命科學(xué)（膠體金,不含甲醛的甲醇等），病理學(xué)和顯鏡學(xué) 微球和粒子和磁珠各種單體和聚體等產(chǎn)品。polysciences公司是世界上zui大zui全的23966上海鼎桑代理 多聚化合物供應(yīng)商,同時(shí)是世界*的免疫學(xué),組織化學(xué)試劑耗材供應(yīng)商.

上海鼎桑polysciences 23966大量現(xiàn)貨供應(yīng)

轉(zhuǎn)染試劑線性PEI溶液的配制（1mg/ml）

聚乙烯亞胺（Polyethylenimine，PEI）是聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機(jī)大分子，每相隔二個(gè)碳個(gè)原子，即每“第三個(gè)原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子，使得聚合物網(wǎng)絡(luò)在任何pH下都能充當(dāng)有效的“質(zhì)子海綿”(proton sponge)體。PEI，可用作轉(zhuǎn)染試劑，它可以縮聚DNA分子形成顆粒并轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞。有實(shí)驗(yàn)證明，分子量為25000的線性PEI即Polysciences 23966轉(zhuǎn)染效率zui高。

下面將主要介紹polysciences 線性PEI(#23966)的產(chǎn)品特性及其溶液的配制過程。

1. 產(chǎn)品特性:

產(chǎn)品名稱：線性聚乙烯亞胺(PEI)

2. 溶液配制

此指導(dǎo)說明書是經(jīng)polysciences公司研究，測試及其客戶反饋的后編寫的。下面推薦一種簡單適用而的方法，講述如何配制濃度為1mg/mL的轉(zhuǎn)染試劑的配制。

材料：

1g #23966、1L 純水（Milli-Q®純水，注射用水（WFI），或類似的生物級(jí)水）、12 M鹽酸、10 M*、一次性0.1-0.2µm PES真空無菌過濾器、無菌高聚乙烯或聚丙烯試劑瓶。

器材：

1 L 玻璃燒杯、1 L玻璃量筒、核準(zhǔn)pH計(jì)、2支1 mL塑料移液管、托盤、聚四氟乙烯（PTFE）攪拌棒、真空泵

配制過程：

1g #23966——900mL水溶解——攪拌、加熱（60-80°C）——加HCl調(diào)pH到2.0左右——蓋上燒杯，攪拌3h（直至粉末*溶解）——冷卻至室溫——加NaOH調(diào)pH到6.9-7.1——移液到量筒，加水補(bǔ)足至1L——真空過濾消毒——分裝，-20°C保存。

備注：加熱或加酸都有助于PEI溶解。當(dāng)然酸可能不用加那么多，詳細(xì)用量可試加一點(diǎn)攪拌看看，足夠溶解就行，不一定需要加到pH那么低。

試劑儲(chǔ)存：

冷凍部分溶液可在-20°C保存長達(dá)一年；部分解凍的溶液可在4°C保存2周，不可反復(fù)凍融。

粉末儲(chǔ)存：

未開封的粉末有效期兩年。可在室溫下保存直至使用。

轉(zhuǎn)染操作流程：(瞬時(shí)轉(zhuǎn)染方法) 轉(zhuǎn)染效率（部分?jǐn)?shù)據(jù)參考，本數(shù)據(jù)來源于網(wǎng)絡(luò)，不作為售后投訴依據(jù)）

1. 接種細(xì)胞： 轉(zhuǎn)染前一天，用膠原酶（WORTHINGTONG 公司 LS004196)消化細(xì)

胞并計(jì)數(shù)（不建議用胰酶）。調(diào)整細(xì)胞濃度，將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿，每個(gè)孔置

入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到 70~80%。

2. 準(zhǔn)備 DNA-PEI 復(fù)合物： DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其

升至室溫。，用 Opti-MEM ITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適

量 DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 線性 PEI 轉(zhuǎn)

染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液 的試管，一邊將稀釋的線性 PEI 轉(zhuǎn)染試劑滴

加至試管中（注意：請(qǐng)勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置 10~25 min 以

形成 DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時(shí)，請(qǐng)用圓底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /14

mL 離心管。

3. 轉(zhuǎn)染細(xì)胞： 直接向每個(gè)孔中加入 DNA-PEI 復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在

無血清條件下轉(zhuǎn)染時(shí)，去除生長培養(yǎng)基，替換成無血清培養(yǎng)基，然后滴 DNA-PEI 復(fù)

合物。轉(zhuǎn)染 3 h 后，添加½體積的包含 30%血清的生長培養(yǎng)基。

4. 孵育細(xì)胞和分析結(jié)果： 在 CO2 培養(yǎng)箱中 37℃下孵育細(xì)胞至可以分析檢測。轉(zhuǎn)

染后快 的話7 h 即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)。 請(qǐng)自行確定適合檢測時(shí)間。

細(xì)胞種類 中文名稱 PEI 轉(zhuǎn)染效率

HEK293 人胚腎細(xì)胞 90%-95%

293-T 人胚腎細(xì)胞 90%-95%

CHO-K1 倉鼠卵巢細(xì)胞 80%-90%

U251 人源神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞 80%-90%

Hela 人源宮頸ai細(xì)胞 70%-80%

COS7 猴 SV40 轉(zhuǎn)化腎細(xì)胞 70%-80%

HepG2 人源肝癌細(xì)胞 70%-80%

NIH/3T3 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 60%-70%

膠質(zhì)瘤干細(xì)胞 人源膠質(zhì)瘤干細(xì)胞 60%-70%

Patu8988 人源胰腺癌細(xì)胞 60%-70%

U2OS 人源骨肉瘤細(xì)胞 60%-70%

轉(zhuǎn)染試劑和 DNA 配比數(shù)據(jù)

細(xì)胞型號(hào) 培養(yǎng)基 每孔細(xì)胞數(shù) DNA 的量 轉(zhuǎn)染試劑量 和培養(yǎng)基混合 4-6h

293H DMEM 3×10

4

0.2µg 0.5µL DMEM+10%FBS

293FT DMEM 3×10

4

0.2µg 0.5µL DMEM+10%FBS

293E DMEM 3×10

4

0.2µg 0.5µL DMEM+10%FBS

293F DMEM 3×10

4

0.2µg 0.5µL DMEM+10%FBS

COS7 DMEM 1.5×10

4

0.4µg 0.5µL DMEM+10%FBS

hela DMEM 2×10

4

0.3µg 0.5µL 1640+15%FBS

Caco2 MEM 3.5×10

4

0.3µg 0.75µL MEM+10%FBS

BHK21 MEM 2×10

4

0.2µg 0.5µL MEM+10%FBS

CHO-DG44 DMEM+HT+pro 2×10

4

0.5µg 0.5µL DMEM+HT+pro +10%FBS

RAW264.7 DMEM 3×10

4

0.2µg 0.5µL DMEM +10%FBS

MCF7

MEM/NEAA+0.01mg/mL insulin + sodium

pyruvat

2×10

4

0.1µg 0.25µL

MEM/NEAA+0.01mg/mL insulin + sodium

pyruvat+10%FBS

SW480 IMDM 3×10

4

0.4µg 0.5µL IMDM +10%FBS

MDCK DMEM 4×10

4

0.6µg 1µL DMEM+10%FBS

CHO-K1 IMDM+Pro 3×10

4

0.2µg 0.5µL IMDM+Pro +10%FBS

HepG2 DMEM 3×10

4

0.5µg 0.75µL DMEM+10%FBS

A549 DMEM 2×10

4

0.3µg 0.5µL DMEM+10%FBS

NIH/3T3 DMEM 1.5×10

4

0.1µg 0.75µL DMEM+10%FBS

vero DMEM 3×10

4

0.3µg 0.75µL DMEM+10%FBS

sf9 SIM SF 5×10

4

0.4µg 0.75µL SIM SF+10%FBS